Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1DF糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失家兔自身肝脏到消失1标准型冠心病针灸病征的实质性率在学龄前中期就有很好的所述，多个家兔自身肝脏阴性的学龄前中都有70%在肝脏转化后10年内患上冠心病，而随访15年的学龄前这一比例缩减到84%。比较于之下，占去针灸1标准型冠心病一半以上的标准型1标准型冠心病的得病机制还从未得到充分的比对。

越来越多的人开始用作分期系统来定义1标准型冠心病的实质性：性状在消失多种家兔自身肝脏时带入第1阶段性，消失血糖异常时带入第2阶段性，消失病征时带入第3阶段性。一些多发家兔自身肝脏阴性的性状，在1期和2期，实质性较更慢，并发展为得病的1标准型冠心病。我们之前所述了一一组在首次扫描到多种家兔自身肝脏样品后将近10年无冠心病的短时间实质性者，这一组病症数量不算，但形态并不恰当。随后，我们发现家兔自身特异性特异性CD8+T蛋白质加成在实质性加速的病症中都基本不发挥作用，但在未来会得病和肇因的冠心病病症中都很容易扫描到。这显然说明，与实质性病症比较于，这些病症免疫加成的调节增强。

早期比对说明，尽管调节性T蛋白质(Treg)数量正常，但冠心病病症发挥作用一些功能弱点，其中都包括对IL-2的加成能力增大。此外，冠心病病症中都的物理现象CD4+T蛋白质显然对调节越来越具抵抗性，表现为物理现象T蛋白质的抑止减慢，自然诱发的Treg和棒状外诱发的诱导Treg，以及特异性个人经历的CD4+T蛋白质中都IL-2加成减慢。本比对的目的是所述了CD4+调节性T蛋白质(Treg)在领头极加速实质性者中都的形态，他们的年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX比对是一项以青年人为基础的主干比对，在21岁以下就诊的病症家庭成员中都检查1标准型冠心病的危险状况。我们之前所述了长期加速实质性者的形态，他们保持多重家兔自身肝脏阴性超过10年，但从未消失冠心病的针灸病征，更慢性或非展开性免疫。随后，10名继续保持无冠心病并愿意提供大量血液样品的加速实质性者归属于T和B蛋白质功能比对。在目前的比对中都，8名更慢实质性者(SP一组)，中都位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身肝脏阴性。所有的旁观者都处于1标准型冠心病实质性的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身肝脏对某些特异性的阴性加成，然而，一名病症已经处于2期将近6年，但从未消失针灸病征，一名病症被诊疗为冠心病，该人脑72岁，在采集实验室样品时，其HbA1c升温到53 mmol/mol(7%)，在比对中都对该遗传物质展开了单独指标。分开外周血单个核蛋白质(PBMCs)，采用多匹配流式蛋白质练成和T蛋白质抑止检测指标遗传物质中都Treg的频带、表标准型和功能。用作FlowSOM和CITRUS(聚类确认、相关联和回归)展开无监督聚类比对，指标Treg表标准型。

结果：与健康遗传物质比较于，来自更慢实质性棒状的梦境CD4+T蛋白质的监督聚类推断，激活的梦境CD4+ Treg频带缩减，与阿托品诱导的TNFR相关蛋白(GITR)理解缩减有关。一名HbA1c升温的病症与实质性加速者和反之亦然的比较于起一组比较于，Treg谱有所相异。功能比对说明，与健康遗传物质比较于，来自加速实质性棒状的Treg激活的CD4+物理现象T蛋白质抑止明显受损。表现为对物理现象CD4+T蛋白质CD25和CD134理解的抑止缩减。

布1 有系统的表标准型比对推断，CD4+Treg亚标准型在更慢实质性队列中都缩减。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -蛋白质上。根据标有物理解确认显露10个元簇:梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用作9个相异Treg标有转化成的10个元簇的MST。每个终端代表一个空降兵(100个空降兵)，越来越大的元空降兵(10个元空降兵)在终端一组周围剪裁。每个终端中都的饼布对此单个标有的理解层级。(b)每个元聚类的热布，以推断整棒状标有理解。(c, d)为HD一组(c)和SP一组(d)转化成布，以及FlowSOM标记的每个元簇的覆盖层。(e-l)比较轻元素为每个metacluster筒本站布(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP一组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白质(l)。粉红色圆圈代表**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检测。此键适用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 用作CITRUS的预测模标准型证实，Treg频带的缩减是实质性加速的徽章。分级门控(a - f)和柑橘比对(g-k)比起SP旁观者和反之亦然的HD旁观者在CD4+CD45RA−T蛋白质上的差异性。(a)杂交CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的民族特色布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解展开分开，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(白斑)一组以及遗传物质SP 606(粉红色)中都CD25+ cd127的频带概要布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的筒本站布;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇折叠由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解气压后处理，左下角醒目的簇被标记为SP和HD队列之间的相异。(j)筒本站布推断了在SP(白斑)和HD(灰点)一组中都，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比较轻元素(比例)。(k)直方布推断每个簇的表标准型(粉红色)和Treg标有比较理解与着重理解(紫色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。着重与所有其他簇中都标有的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对下标秩检测

布3 与健康献血者比较于，实质性加速者梦境treg的GITR缩减。每个梦境CD4+T蛋白质元簇(梦境T蛋白质_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白质;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白质;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个理解标有的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热布(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中都所有HD(粉红色)、所有SP(紫色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR理解结合，推断直方布(c)和概要布(d)。Wilcoxon配对下标秩和检测，p< 0.07(粉红色)所有遗传物质包括，p< 0.05(紫色)遗传物质SP 606和反之亦然的HD不包括在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR理解，从分级门控，从所有HD(粉红色)、所有SP(紫色)和SP 606(粉红色)结合，推断直方布(e)和概要布(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对下标秩检测

布4 来自加速实质性的CD4+ treg蛋白质操控物理现象CD4+T蛋白质的能力增大。SP一组用紫色的本站和圆圈对此，HD一组用黑色的本站和圆圈对此，粉红色的本站/圆圈对此遗传物质sp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被标有为CFSE, Treg按捕捉到的比例指示剂。用抗CD3 /28微珠激活蛋白质，人才3翌日展开流式蛋白质练成扫描。(a-d)与CD4+反之亦然者比较应的treg人才(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者人才。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE抑止百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止百分比。用作阴性比较于起(激活的响应蛋白质包含treg)计算抑止百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

布5 物理现象CD4+T蛋白质对加速实质性的T蛋白质激活的抑止越来越敏感。SP一组用紫色的本站和圆圈对此，HD一组用黑色的本站和圆圈对此，粉红色的本站/圆圈对此遗传物质sp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白质展开分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel标有，treg按捕捉到的比例指示剂。用抗CD3 /28微珠激活蛋白质，人才3翌日展开流式蛋白质练成(CD25反染)和蛋白质因子比对。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者合作人才。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE抑止三份(b)。(c,d) CD25抑止三份(c)和CD134抑止三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中都的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比起测试

结论：我们得显露的结论是，来自加速实质性子的激活梦境CD4+Treg在GITR理解中都得到了扩展和丰富，特别强调了更进一步比对Treg在1标准型冠心病风险性状中都的异质性的必要性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28